【摘要】：肉蓯蓉(Cistanche deserticols Ma)為列當(dāng)科肉蓯蓉屬植物。其主要活性成分為苯乙醇甙類化合物。為解決肉蓯蓉資源匱乏,滿足人們需求,本文開展了利用肉蓯蓉細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)苯乙醇甙類化合物的可行性研究,以及對(duì)肉蓯蓉懸浮培養(yǎng)體系中苯乙醇甙合成的調(diào)控研究,并對(duì)肉蓯蓉毛狀根的培養(yǎng)進(jìn)行了初步研究。 利用細(xì)胞團(tuán)克隆法篩選出穩(wěn)定的肉蓯蓉高產(chǎn)愈傷組織,培養(yǎng)基配方為B5+CH(500mg/L)+IAA(2 mg/L)+BA(1 mg/L),生長周期為25d,干重達(dá)到13.2g/L,其苯乙醇甙含量達(dá)到干重的12.9%。HPLC 檢測(cè)結(jié)果表明其苯乙醇甙類化合物各成分與野生中一致,均有所提高。 建立了肉蓯蓉細(xì)胞懸浮培養(yǎng)體系,培養(yǎng)基配方為MS+GA3 (10mg/L)+BA(0.5mg/L) +CH( 800 mg/L),生長周期為36d,生長曲線呈“S 型”。干重達(dá)到15.4g/L,其苯乙醇甙含量達(dá)到干重的2.4%,與野生中含量幾乎相等。HPLC 檢測(cè)結(jié)果表明其主要成分較野生肉蓯蓉復(fù)雜。 兩種非生物誘導(dǎo)子茉莉酸甲酯和水楊酸都能誘導(dǎo)肉蓯蓉懸浮培養(yǎng)細(xì)胞苯乙醇甙的生物合成。誘導(dǎo)子的作用效果與誘導(dǎo)子的濃度和添加時(shí)間有關(guān)。與未經(jīng)誘導(dǎo)子處理的細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果相比,MJ 在對(duì)數(shù)生長初期(培養(yǎng)14d),添加濃度為5μmol/L 條件下,對(duì)細(xì)胞干重?zé)o抑制作用,可使肉蓯蓉懸浮細(xì)胞系中PeG 含量提高2.59 倍;而SA 在對(duì)數(shù)生長后期(培養(yǎng)28d),添加濃度為50μmol/L 條件下,對(duì)細(xì)胞干重有抑制作用,但可使PeG含量提高2.71 倍。經(jīng)兩種誘導(dǎo)子處理的肉蓯蓉細(xì)胞中,PAL 酶活性均明顯增強(qiáng)。 利用發(fā)根農(nóng)桿菌感染肉蓯蓉愈傷組織,誘導(dǎo)出了毛狀根,但其誘導(dǎo)率低,且生長慢,無分支。PCR 檢測(cè)結(jié)果表明,此毛狀根是由TL-DNA 轉(zhuǎn)化所產(chǎn)生。本試驗(yàn)表明,利用毛狀根技術(shù)生產(chǎn)肉蓯蓉中苯乙醇甙類化合物,還需進(jìn)一步探討。
